Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
Если указано в частной статье, процентное содержание одного или нескольких компонентов анализируемой пробы определяют посредством вычисления процентной доли площади соответствующего пика или пиков в суммарной площади всех пиков, исключая пики растворителей или добавленных реактивов (метод внутренней нормализации). В этих случаях рекомендуется использование широкодиапазонного усилителя и автоматического интегратора.
# КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ
Абсолютная градуировка. Испытуемый раствор и раствор сравнения попеременно хроматографируют на газовом хроматографе в условиях, указанных в частной статье. Для испытуемого раствора и раствора сравнения рассчитывают средние значения площадей или высот пиков анализируемого вещества. По полученным средним значениям рассчитывают концентрацию анализируемого вещества в испытуемом растворе.
Метод внутреннего стандарта. Для каждой хроматограммы сначала рассчитывают отношение площади или высоты пика анализируемого вещества к площади или высоте пика внутреннего стандарта. Полученные отношения усредняют для испытуемого раствора и раствора сравнения и по найденным средним значениям определяют концентрацию анализируемого вещества в испытуемом растворе.
Методика. Полная неопределенность методики анализа должна соответствовать требованиям статьи «Валидация аналитических методик и испытаний. Раздел D. Критерии проведения валидации методик количественного определения».
При этом необходимо, чтобы неопределенность пробоподготовки была незначима по-сравнению с полной неопределенностью методики анализа (см. там же).
Рекомендуется использовать следующую методику проведения конечной аналитической операции (хроматографирования). Хроматографируют несколько раз (n0) раствор сравнения и определяют относительное стандартное отклонение (RSD) хроматографического сигнала (площадь или высота пика в случае абсолютной калибровки, отношения площади или высоты пика к площади или высоте пика внутреннего стандарта в методе внутреннего стандарта). Величина n0 является достаточной, если значение RSD не превышает значение RSDmax. Значение RSDmax. является характеристикой теста “Проверка пригодности хроматографической системы” и должна соответствовать требованиям Табл. 1.
Таблица 1.
Требования к RSDmax. При проведении количественного определения на
этапе проверки пригодности хроматографической системы (предполагается, что неопределенность пробоподготовки незначительна в сравнении с полной __________________неопределенностью методики анализа) _____________
По 2 3 4 5 6 7 8
RSDmax- (%)
Превышение верхнего Субстанции
предела определения
испытуемого вещества
над 100% (%)
1 0.16 0.42 0.60 0.74 0.86 0.96 1.06
1.5 0.24 0.63 0.90 1.11 1.29 1.44 1.58
2 0.32 0.84 1.20 1.48 1.72 1.93 2.11
3 0.48 1.26 1.80 2.23 2.58 2.89 3.17
Полусумма верхнего и Готовые лекарственные средства
нижнего предела
содержания
испытуемого вещества
к номинальному
значению (%)
5 0.25 0.67 0.96 1.19 1.38 1.54 1.69
7.5 0.38 1.01 1.44 1.78 2.06 2.31 2.53
10 0.51 1.34 1.92 2.37 2.75 3.08 3.38
15 0.76 2.01 2.88 3.56 4.13 4.62 5.07
20 1.01 2.68 3.85 4.75 5.50 6.16 6.76
Если полученное значение RSD. не превышает значение RSDmax., приведенное в Табл.1., попеременно хроматографируют одинаковое количество n > n0 раз раствор сравнения и испытуемый раствор (или несколько испытуемых растворов, если анализируют несколько серий).
Возможно значительное изменение величины n за предел объединения выборок растворов сравнения и анализируемого (ых) раствора (ов) от предела объединенного стандартного отклонения (см. статью «Статистический анализ результатов химического эксперимента»).
# КОНТРОЛЬ ПРИМЕСЕЙ
Для контроля примесей обычно используют следующие подходы.
1. Количественное определение примеси с использованием раствора сравнения с известной концентрацией примеси (обычно в методе абсолютной калибровки). Такой подход предполагает одинаковый сигнал примеси в присутствии и в отсутствии основного вещества.
2. Метод внутренней нормализации. Такой подход предполагает выполнение линейности в широком диапазоне и может потребовать учета различий в сигналах примеси и основного вещества. Его часто применяют для определения суммы примесей. При этом сумму площадей всех пиков на хроматограмме (без учета пика растворителя) принимают за 100% и содержание каждой конкретной примеси или суммы примесей находят как долю площади пика этой примеси или суммы площадей пиков примесей в общей сумме площадей всех пиков на хроматограмме.
